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工具实验计算

核酸浓度换算:OD260、ng/µL 与 pmol 互转

A260 转质量浓度,ng 与 pmol 互转,支持 dsDNA / ssDNA / RNA / 寡核苷酸。


A260 转质量浓度用的是各类核酸的经验消光系数(1 cm 光程、A260 = 1 时):

核酸类型 A260 = 1 对应浓度
双链 DNA (dsDNA) 50 µg/mL
单链 DNA (ssDNA) 33 µg/mL
RNA 40 µg/mL
寡核苷酸 约 33 µg/mL

浓度 = A260 × 系数 × 稀释倍数。

质量与摩尔量互转用平均分子量:dsDNA 每个碱基对约 660 g/mol, 单链核酸每个核苷酸约 330 g/mol。所以

dsDNA:  pmol = ng × 1000 / (660 × bp)
ssDNA:  pmol = ng × 1000 / (330 × nt)

关于纯度比值: A260/A280 反映蛋白污染,DNA 约 1.8、RNA 约 2.0 为佳; A260/A230 反映盐、酚、胍类残留,理想值 2.0–2.2。比值偏低说明有污染, 但比值正常不代表核酸完整——降解的 RNA 一样可以有漂亮的 260/280,要看电泳或 RIN 值。

对寡核苷酸,用 660/330 这种平均分子量会有偏差,序列已知时请用合成厂商给的精确消光系数。

常见问题

A260/A280 是 1.8 就说明 DNA 质量好吗?

只能说明蛋白污染少。核酸是否降解要看凝胶电泳或 Bioanalyzer/TapeStation 的片段分布。

为什么 Qubit 和 NanoDrop 测出来差很多?

NanoDrop 测的是所有 260 nm 吸光物质,游离核苷酸和 RNA 都算进去;Qubit 用特异性荧光染料,通常更接近真实 dsDNA 量。

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