核酸浓度换算:OD260、ng/µL 与 pmol 互转
A260 转质量浓度用的是各类核酸的经验消光系数(1 cm 光程、A260 = 1 时):
| 核酸类型 | A260 = 1 对应浓度 |
|---|---|
| 双链 DNA (dsDNA) | 50 µg/mL |
| 单链 DNA (ssDNA) | 33 µg/mL |
| RNA | 40 µg/mL |
| 寡核苷酸 | 约 33 µg/mL |
浓度 = A260 × 系数 × 稀释倍数。
质量与摩尔量互转用平均分子量:dsDNA 每个碱基对约 660 g/mol, 单链核酸每个核苷酸约 330 g/mol。所以
dsDNA: pmol = ng × 1000 / (660 × bp)
ssDNA: pmol = ng × 1000 / (330 × nt)
关于纯度比值: A260/A280 反映蛋白污染,DNA 约 1.8、RNA 约 2.0 为佳; A260/A230 反映盐、酚、胍类残留,理想值 2.0–2.2。比值偏低说明有污染, 但比值正常不代表核酸完整——降解的 RNA 一样可以有漂亮的 260/280,要看电泳或 RIN 值。
对寡核苷酸,用 660/330 这种平均分子量会有偏差,序列已知时请用合成厂商给的精确消光系数。
常见问题
A260/A280 是 1.8 就说明 DNA 质量好吗?
只能说明蛋白污染少。核酸是否降解要看凝胶电泳或 Bioanalyzer/TapeStation 的片段分布。
为什么 Qubit 和 NanoDrop 测出来差很多?
NanoDrop 测的是所有 260 nm 吸光物质,游离核苷酸和 RNA 都算进去;Qubit 用特异性荧光染料,通常更接近真实 dsDNA 量。