PCR 反应体系配制计算器（含多样本预混）

吸头挂壁和分装残留会让最后一管不够。样本数少时至少多配一管的量。

不可以。每管模板不同，必须在分装之后单独加。只有做重复孔时才可以先混。

不要。2× Master Mix 里已经含 buffer、dNTP、Mg²⁺ 和酶，只需再算引物、模板和水。

按储液浓度与终浓度算出每种组分取样量与补水量，支持多样本批量预混。

单管反应体积 (µL)

样本数

预混余量 (%)

组分：每行 名称储液浓度终浓度（单位自洽即可）

每管模板体积 (µL，分装后单独加)

配 PCR 体系就是对每种组分各算一次 C₁V₁ = C₂V₂：

某组分取样体积 = 终浓度 / 储液浓度 × 反应总体积
补水体积       = 反应总体积 − 各组分体积之和

多样本时要配预混液（master mix），不要一管一管加：移液器在小体积（< 2 µL）时的相对误差可以到 10% 以上，逐管加会把这个误差引进每一管；预混一次再分装，误差只发生一次。

预混液要多配一点。 常规做法是按 n + 10% 配（本工具默认），因为吸头挂壁和分装残留会让最后一管不够。样本数少时至少多配一管的量。

几个常见错误：

终浓度单位没对齐。 引物储液常标 100 µM，终浓度常写 0.2 µM，中间差 500 倍；dNTP 储液标 10 mM 而终浓度 0.2 mM。单位混用是最常见的翻车点。
模板不要进预混液。 每管模板不同，模板必须在分装之后单独加。
酶最后加，加完轻弹混匀不要涡旋。 聚合酶怕剪切力。
2× Master Mix 产品里已经含有 buffer、dNTP、Mg²⁺ 和酶，此时只需要算引物、模板和水，不要重复加。

常见问题

吸头挂壁和分装残留会让最后一管不够。样本数少时至少多配一管的量。

不可以。每管模板不同，必须在分装之后单独加。只有做重复孔时才可以先混。

不要。2× Master Mix 里已经含 buffer、dNTP、Mg²⁺ 和酶，只需再算引物、模板和水。