完全培养基配制计算器(血清与添加剂按终体积反算)
配完全培养基是细胞房里的例行操作,但它有一个几乎人人犯过的错: 把基础培养基当成起始体积,而不是补足体积。
坑在哪
要配 500 mL 含 10% FBS、1× 双抗的 DMEM,正确做法是:
FBS = 500 × 10% = 50 mL
双抗 = 500 ÷ 100 = 5 mL (母液 100×)
基础培养基 = 500 − 50 − 5 = 445 mL ← 补足,不是起始
合计 500 mL
常见的错法是直接拿一整瓶 500 mL 基础培养基,往里加 50 mL 血清和 5 mL 双抗。 结果终体积变成 555 mL,血清实际只有 50 ÷ 555 = 9.01%,双抗也只有 0.90×。
一次 1% 的偏差看起来无所谓,但它会累积:加的添加剂种类越多, 每一样都被稀释得越厉害;而且不同批次配出来的浓度不一致, 这正是「同样的细胞这周长得比上周慢」这类问题里最难查的一种原因。
怎么算
某组分体积 = 终体积 × 目标比例 (血清、按百分比给的组分)
某组分体积 = 终体积 ÷ (母液倍数 ÷ 目标倍数) (按 ×N 母液给的组分)
基础培养基 = 终体积 − 所有组分体积之和
第二条式子的常见写法是「母液 100×、终浓度 1×,所以加 1/100 体积」。 本工具把每一项的算式都写出来,可以逐项核对。
可以验算
| 配方 | 结果 |
|---|---|
| 500 mL、10% FBS、双抗 100×→1× | 基础 445.0 mL、FBS 50.0 mL、双抗 5.0 mL |
| 50 mL、10% FBS、双抗 100×→1× | 基础 44.5 mL、FBS 5.0 mL、双抗 0.5 mL |
| 500 mL、20% FBS、双抗 100×→1×、谷氨酰胺 100×→1× | 基础 390.0 mL、FBS 100.0 mL |
第二行是最常用的小量配制(一个 T25 瓶大约用 5 mL), 第三行说明多种添加剂时基础培养基要同时扣掉所有项。
适用边界
- 算的是体积比例,不处理摩尔浓度。要从固体配母液请用本站的分子量计算器。
- 不校验配方是否适合你的细胞系。10% FBS 是通行起点,但某些细胞系要 5%、 20% 或无血清,以供应商的推荐为准。
- 热灭活血清(HI-FBS)与普通 FBS 的体积算法相同,差别在用途不在算术。
- 抗生素不是必需品。长期加双抗会掩盖轻度污染, 等停药时问题才集中爆发——这一条和算术无关,但比算术重要。
常见问题
为什么不能直接往一瓶 500 mL 培养基里加血清?
因为百分比是**相对终体积**的。往 500 mL 里加 50 mL 血清和 5 mL 双抗,终体积变成 555 mL,血清实际只有 50 ÷ 555 = 9.01%,双抗 0.90×。一次 1% 看着无所谓,但添加剂种类越多稀释越厉害,而且不同批次配出来的浓度不一致——「同样的细胞这周长得比上周慢」这类问题里,这是最难查的原因之一。
母液倍数和目标倍数怎么填?
按瓶子上写的填。青链霉素双抗常见是 100× 母液、终浓度 1×,就填「青链霉素双抗 100 1」,工具会算出加 1/100 体积。若某种添加剂你要用 2× 终浓度,目标倍数就填 2。目标倍数不能高于母液倍数——母液不够浓,那是配不出来的,工具会直接报错。
热灭活血清(HI-FBS)要另外算吗?
体积算法完全相同,差别在用途不在算术:热灭活是 56 °C 30 分钟破坏补体,用于对补体敏感的实验。需要注意的是**反复冻融比热灭活更伤血清**,建议按单次用量分装冻存。
一定要加抗生素吗?
不一定,而且长期加有代价。双抗会掩盖轻度支原体或细菌污染,让问题潜伏到停药或做无抗实验时才集中爆发。操作规范的细胞房常规培养可以不加,只在原代分离、转染后等高风险节点短期使用。这一条和算术无关,但比算术重要。
配好的完全培养基能放多久?
一般 4 °C 两到四周,但真正的限制是**谷氨酰胺**——它在液体培养基里会自发降解,半衰期在 4 °C 下约数周、37 °C 下只有几天,降解产物氨对细胞有毒。所以长期储存建议用稳定型二肽谷氨酰胺,或配小批量、现配现用。本工具对此只做提示,具体以你用的培养基说明书为准。