qPCR 2^-ΔΔCt 相对定量在线计算
2^-ΔΔCt 法（Livak 法）是 qPCR 相对定量最常用的算法，三步：
ΔCt = Ct(目的基因) − Ct(内参基因) 同一个样本内
ΔΔCt = ΔCt(处理组样本) − ΔCt(对照组均值)
倍数 = 2^(−ΔΔCt)
指数里的 2 表示每个循环产物翻一倍，也就是假设扩增效率恰好是 100%。
这个假设是 2^-ΔΔCt 法最大的软肋。 如果目的基因和内参的扩增效率相差较大， 结果会系统性偏移。规范做法是先做标准曲线，确认两对引物效率都在 90–110% 且彼此接近； 差得多就改用 Pfaffl 法，用各自的实际效率作底数。 效率和 Pfaffl 比值可以用扩增效率计算器直接算。
其他要点：
- 内参必须在你的处理条件下真的稳定。缺氧、增殖变化会让 GAPDH、ACTB 不再可靠， 最好先用 geNorm/NormFinder 之类的方法筛内参。
- 技术重复用来评估上样误差，生物学重复才能做统计检验。用技术重复算 p 值是无效的。
- 统计检验应该在 ΔCt 或 ΔΔCt 层面做（这是近似正态的量），而不是在 2^-ΔΔCt 之后， 因为指数变换会把分布拉偏。
常见问题
为什么倍数要用 2 的次方？
2 代表每个 PCR 循环产物翻一倍，即 100% 扩增效率。效率偏离较大时应改用 Pfaffl 法，用实测效率作底数。
能用技术重复做 t 检验吗？
不能。技术重复只反映上样与仪器误差，统计推断必须基于独立的生物学重复。
相关解读
- 2026-10-29
胶质母细胞瘤复发背后的巨噬细胞-间质反馈环，与人参皂苷Rd在糖尿病创面的M2极化证据
三篇文章合起来回答同一问题：巨噬细胞被疾病微环境改造的逻辑是什么，以及这种可塑性能否被药物引导到修复方向。GBM复发和脓毒症心肌病的综述描述了"被劫持"的一侧，人参皂苷Rd在糖尿病小鼠创面的实验数据给出了反向证据。
- 2026-10-28
全氟十二酸耗竭斑马鱼中性粒细胞与巨噬细胞，抗氧化干预可部分逆转
长链全氟化合物PFDoA在斑马鱼胚胎72小时暴露内即造成中性粒细胞、巨噬细胞减少和胸腺萎缩，转录组与qPCR指向ROS驱动的炎症凋亡轴，虾青素共暴露仅能部分挽救，提示毒性路径不止一条。读者可据此判断该机制模型的完整性与外推限度。
- 2026-10-27
外周阻断CXCR3减少tau病变小鼠脑内T细胞浸润并改善认知
CXCR3是tau蛋白病小鼠脑内T细胞浸润的趋化门控，系统性封锁后神经退行减轻、认知改善（Neuron）；CCL2-CCR2轴在急性脊髓损伤与慢性EAE中驱动截然相反的免疫程序，同一靶点在不同情境下效果可能镜像颠倒；FPIES患儿中2个miRNA组合鉴别诊断AUC达0.98。三篇均为小鼠模型或小样本探索。