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工具实验计算

病毒感染复数 (MOI) 计算器

输入细胞数、目标感染复数与病毒滴度,计算所需病毒体积;基于泊松分布给出理论感染率与单次感染比例,支持由实测感染率反算实际 MOI。

感染复数(Multiplicity of Infection,MOI)是每个靶细胞平均受到的病毒颗粒(或细菌)数量,是病毒学、基因递送与感染实验中最基础的设计参数之一。

基本用量计算

所需感染单位(IU)= MOI × 细胞数 N
所需病毒体积(mL)= 所需 IU ÷ 病毒滴度(IU/mL)

验证算例:5×10⁵ 个细胞,目标 MOI = 3,病毒滴度 = 1×10⁸ TU/mL:

泊松分布与感染率

当每个病毒颗粒独立随机感染细胞时,每个细胞接受的病毒颗粒数服从泊松分布(Poisson distribution),参数 λ = MOI,由此推导:

未被感染的概率  P(0)  = e^(−MOI)
恰好感染一次    P(1)  = MOI × e^(−MOI)
至少感染一次    P(≥1) = 1 − e^(−MOI)

常用 MOI 对应的理论感染率(验证:MOI = 1 时,P(≥1) = 1 − e^(−1) ≈ 0.632,即 63.2%):

MOI 感染率 P(≥1) 单次感染 P(=1)
0.1 9.5% 9.1%
0.3 25.9% 22.2%
1.0 63.2% 36.8%
3.0 95.0% 14.9%
5.0 99.3% 3.4%
10.0 >99.9% 0.05%

单拷贝整合实验(克隆分析、插入位点追踪)要求 MOI ≤ 0.3。 真正该看的不是总感染率,而是被感染细胞中只含 1 个病毒的比例,即 P(=1) ÷ P(≥1): MOI 0.3 时是 85.7%,MOI 1.0 时降到 58.2%,MOI 3.0 时只剩 15.7%。 结果里单列了这一项。

由实测感染率反算 MOI

若已通过流式细胞术或荧光显微镜测得感染率 f,可反推实际 MOI:

实际 MOI = −ln(1 − f)

验证:GFP 阳性率 f = 0.85,则实际 MOI = −ln(1 − 0.85) = −ln(0.15) ≈ 1.90。

注意:当 f ≥ 0.99 时,ln 函数斜率趋于无穷,反算结果不可靠,实验上无法可靠区分 MOI 4.6 与 MOI 10 的差异。

适用边界与常见错误

1. 滴度单位须与实验系统匹配:慢病毒常用 TU/mL(转导单位),腺病毒用 VP/mL 或 IFU/mL,噬菌体用 PFU/mL,细菌用 CFU/mL。本工具不区分单位,混用会导致结果错误。

2. 滴度具有细胞系依赖性:慢病毒 TU/mL 通常在 293T 细胞上测定,用于其他细胞系时实际效率可能相差数倍,计算值仅为起点参考。

3. 泊松模型在极高 MOI(> 50)时精度下降:此时细胞表面受体趋于饱和,实际感染率低于理论预测,模型不再适用。

4. 感染体积不应过大:通常要求感染时病毒体积不超过培养基总量的 10%,以免稀释效应降低感染效率;必要时先超速离心浓缩病毒上清。

常见问题

MOI 为 1 时为什么不是 100% 的细胞被感染?

泊松分布的随机性决定了即使平均每个细胞分配到 1 个病毒,也有约 37%(= e^(−1) ≈ 0.368)的细胞一个都分不到,同时约 18% 的细胞会被 2 个以上病毒同时感染。

慢病毒制备稳定细胞系时应选多大的 MOI?

若要确保单拷贝整合(如功能筛选、整合位点分析),建议 MOI ≤ 0.3,此时被感染的细胞中超过 90% 来自单次整合事件。若只追求高转导率,MOI 3–5 通常足够,理论感染率约 95%–99%。

病毒原液算出来的体积不到 1 µL,怎么操作?

先将原液用培养基做 1:10 稀释,把输入的病毒滴度改为原来的 1/10,重新计算即可获得可操作体积(通常 ≥ 5 µL)。稀释操作需在冰上进行,避免反复冻融导致滴度下降。

p24 ELISA 测出的 ng/mL 能直接当感染单位用吗?

不能。p24 反映物理颗粒数,不等于功能性感染单位(TU/mL)。需在目标细胞上做功能性滴定(流式检测荧光蛋白阳性率或荧光灶计数),才能得到本工具所需的 IU/mL。

细菌侵袭实验(如 Salmonella、Listeria)也能用这个公式吗?

基本用量公式(CFU = MOI × N)完全适用。但泊松感染率预测(P(≥1) = 1 − e^(−MOI))是为随机病毒感染设计的,细菌主动侵袭不严格服从泊松过程,感染率数字仅供参考。

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