琼脂糖凝胶浓度选择与称量计算器（附 TBE / TAE 取舍）
「跑多大的胶」这个问题，各家给的答案并不一样。
同样是 0.5% 的胶，Bio-Rad 的表写 1–30 kb，miniPCR 的表写 2–50 kb； 1.0% 那一行，Bio-Rad 是 500 bp–10 kb，miniPCR 是 400–8,000 bp。 常用区间（0.7–2%）三家大体一致，极端浓度处差到两倍。
所以浓度是个粗选：它决定你能不能把两条带分开，不是一把刻度尺。
分辨范围（Bio-Rad Bulletin 6206）
| 浓度 | 分辨范围 |
|---|---|
| 0.50% | 1–30 kb |
| 0.75% | 800 bp–10 kb |
| 1.00% | 500 bp–10 kb |
| 1.25% | 400 bp–7 kb |
| 1.50% | 200 bp–3 kb |
| 2.00% | 100 bp–2.5 kb |
| 3.00% | 40 bp–2 kb |
| 4.00% | 10–400 bp |
3% 和 4% 要用专门的筛分型琼脂糖（sieving agarose），普通琼脂糖配到这个浓度 又脆又难灌。
称量
琼脂糖(g) = 浓度(%) × 凝胶体积(mL) ÷ 100
也就是「1 g 溶在 100 mL 缓冲液里是 1%」。这条没有争议。
但体积容易算多：按胶盘长 × 宽 × 厚算出来的是几何体积，实际不会灌到齐平。 Bio-Rad 自己的表里，7 × 7 cm、0.5 cm 厚列的是 20 mL，几何体积却是 24.5 mL。
这个折扣不是固定比例：同样对着 Bio-Rad 的表，7×7 盘是几何值的 0.82、 15×7 是 0.76、15×15 是 0.89——所以没有一个「通用系数」可用， 谁给你一个固定折扣都是编的。本工具按几何体积算（算术确定，且是上限）， 同时把厂商值的区间标出来。多称一点的后果只是胶稍硬，不会失败。
缓冲液：TBE 还是 TAE
这一条和跑胶效果关系不大，和下游关系很大。NEB 的说明：
- TBE 对小片段分辨更好，低于 15 bp 的片段在 TAE 里可能分不开； 常规跑胶 NEB 推荐 TBE。
- 硼酸会抑制很多酶。跑完要切胶回收、拿去连接/酶切/测序的， TBE 残留会带来麻烦，这种场合通常选 TAE。
- 大片段（≥ 12–15 kb）建议 TAE 配低场强（1–2 V/cm）。
一句话：只看带就用 TBE，要把带切下来接着用就用 TAE。
配缓冲液本身见 缓冲液配制计算。
跑完之后
条带位置反推片段大小见 凝胶条带大小—— 那是按 marker 做半对数回归，比肉眼在 marker 之间插值准得多。
这个工具不管什么
- 染料与成像：EB、GelRed、SYBR 各有各的灵敏度与安全要求，不在范围内。
- 电压与时间：取决于胶长和缓冲液，大片段要低场强慢跑（见上）。
- RNA 胶：变性胶（甲醛/乙二醛）是另一套体系，这里只管 DNA 的普通胶。
- 脉冲场：超过 30–50 kb 的分离要 PFGE，常规电泳做不到。
分辨范围表取自 Bio-Rad 公布的 Bulletin 6206；缓冲液取舍取自 NEB 公开的说明。
常见问题
为什么不同资料给的分辨范围不一样？
因为这张表本来就是经验值，各家按自己的产品和条件标定。同样 0.5% 的胶，Bio-Rad 写 1–30 kb，miniPCR 写 2–50 kb；1.0% 那一行一个写 500 bp–10 kb、一个写 400–8,000 bp。常用区间（0.7–2%）三家大体一致，极端浓度处能差到两倍。所以把浓度当粗选用就好——它决定两条带能不能分开，不是刻度尺。
该称多少琼脂糖？
琼脂糖(g) = 浓度(%) × 凝胶体积(mL) ÷ 100，也就是「1 g 溶在 100 mL 里是 1%」。**容易吃亏的是体积**：按胶盘长×宽×厚算出来的是几何体积，实际不会灌到齐平。Bio-Rad 自己的表里 7 × 7 cm、0.5 cm 厚列的是 20 mL，几何体积却是 24.5 mL。而且这个折扣**不是固定比例**——对着同一张表，7×7 盘是 0.82、15×7 是 0.76、15×15 是 0.89，所以没有通用系数可用。本工具按几何体积算并标出厂商值区间，多称一点只是胶稍硬，不会失败。
TBE 和 TAE 到底怎么选？
只看带就用 TBE，要把带切下来接着用就用 TAE。TBE 对小片段分辨更好（低于 15 bp 的片段在 TAE 里可能分不开），NEB 常规推荐 TBE；但**硼酸会抑制很多酶**，切胶回收后拿去连接、酶切、测序时残留会带来麻烦。另外大于 12–15 kb 的片段 NEB 建议用 TAE 配低场强（1–2 V/cm）。
3% 和 4% 的胶为什么不好灌？
普通琼脂糖配到这个浓度又脆又容易凝得不均匀。这两档要用筛分型琼脂糖（sieving agarose），它是专门为小片段分离做的。如果只是偶尔要分 100 bp 以下的片段，用聚丙烯酰胺胶通常比硬灌 4% 琼脂糖省事。
片段跨度很大怎么办？
一块胶分不开两头。比如同时要看 100 bp 和 20 kb，没有哪个浓度能兼顾——表里每一档的上下限差 10–30 倍，跨度超了就只能跑两块不同浓度的胶。超过 30–50 kb 的分离常规电泳做不到，要用脉冲场电泳（PFGE）。
跑完之后怎么估条带大小？
别用肉眼在 marker 之间插值——迁移距离和片段大小是半对数关系，线性插值会系统性高估。站上的[凝胶条带大小](../gel-band-size/)按 marker 做半对数回归，并会把线性内插的偏差一并算给你看。