平板菌落计数与 CFU/mL 换算（可计数范围 / ISO 加权平均 / 泊松误差）
数完菌落换算成 CFU/mL，算式本身只有一步：
CFU/mL = 菌落数 × 稀释倍数 ÷ 涂布体积 (mL)
涂 100 µL 就是除以 0.1，也就是乘 10——漏掉这一步结果差整整一个数量级， 而且算出来的量级看着仍然“像那么回事”。但比这一步更值得说清楚的是另外三件事。
一、可计数范围不是规矩，是统计
常见的说法是「只数 25–250 或 30–300 的板」。这不是谁定的规矩，是泊松分布的结果：
数 n 个菌落，相对标准差就是 1/√n。
| 数到的菌落数 | 相对标准差 |
|---|---|
| 10 | ±32% |
| 30 | ±18% |
| 100 | ±10% |
| 250 | ±6.3% |
| 1000 | ±3.2% |
下限是这么来的——数 10 个菌落，光是随机涨落就有三成误差，再精确的移液也救不回来， 因为这个误差不来自你的操作，来自计数本身。
上限则是另一个原因：菌落多了会互相挤压、并成一片，看起来是一个其实是好几个， 于是系统性低估，而且越密漏得越多。所以「板上长满了，估一个数」是最糟的做法—— 它同时踩了「超出线性范围」和「用估的数当测量值」两个坑。正确做法是重做一块铺得更稀的。
二、多个稀释度都可数时，要加权平均
如果 10⁻² 和 10⁻³ 两个稀释度的板都落在可计数范围内，别随便挑一个—— 两个都带信息，扔掉一个等于浪费了一半数据。ISO 4833-1 给的公式是：
N = ΣC ÷ [ V × (n₁ + 0.1 × n₂) × d ]
ΣC：所有参与计算的板上菌落数之和n₁：最低被采纳稀释度的板数n₂：次一级（高一个数量级）稀释度的板数d：最低被采纳的稀释度（分数形式，稀释 100 倍就是 0.01）—— 注意本工具的表单填的是倍数（100），内部会取倒数换成 d，两者互为倒数，弄反会差 100 倍V：每板涂布体积（mL）
那个 0.1 不是经验系数，就是稀释倍数之比——高一级稀释度的板，每个菌落代表的
原液体积是低一级的十分之一，所以它在加权里只算 0.1 个板的份量。
本工具自动判断哪些板可数、按这个公式算，并把参与计算的板列出来。
三、CFU 不是细胞数
菌落形成单位（colony-forming unit）数的是长出了菌落的那些单元。 成串的链球菌、抱团的葡萄球菌、黏在一起的两个细胞——都只长出一个菌落。 所以 CFU 系统性低于真实细胞数，低多少取决于这株菌爱不爱抱团、涡旋打散得够不够。
这也是平板计数和 OD 换算经常对不上的原因之一：OD 数的是所有挡光的颗粒 （活的死的都算），CFU 只数活的且能长成单菌落的。两者在对数期接近， 进入稳定期后会越差越多。报告时写清用的是哪一种。
数据出处
加权平均公式来自 ISO 4833-1:2013（食品链微生物学，30 °C 倾注平板菌落计数）， 可计数范围的两套常见取值分别见该标准与 FDA BAM 第 3 章（需氧菌平板计数）。 不同标准的取值本就不一致（25–250 与 30–300 都在用），本工具把上下限做成 可改的输入，默认取 25–250；以你所在领域采用的标准为准。
泊松相对标准差 1/√n 是分布本身的性质，不依赖任何标准。
相关工具
感受态转化效率（同样要折算铺板比例）见 转化效率计算； 由 OD₆₀₀ 估菌液浓度见 OD₆₀₀ 换算； 梯度稀释怎么配见 稀释计算器； 倍增时间见 倍增时间计算。
常见问题
为什么只能数 25–250（或 30–300）个菌落的板？
下限是统计决定的：数 n 个菌落，泊松分布下相对标准差就是 1/√n——数 10 个是 ±32%，数 30 个是 ±18%。这个误差**不来自你的操作，来自计数本身**，移液再准也救不回来。上限是另一个原因：菌落太密会互相挤压、并成一片，看起来一个其实好几个，于是系统性低估，越密漏得越多。两套取值（25–250 与 30–300）分别来自不同标准，本工具做成可改的输入。
板上长满了数不清，能不能估一个数？
不能。估出来的不是测量值，而且必然偏低——密集时菌落已经并成片了。正确做法是重做一块铺得更稀的，或者把菌液再稀释一个梯度重铺。如果样品珍贵不能重做，就只能报成「大于某个值」，而不是给一个具体数字。
两个稀释度的板都在可计数范围，该用哪个？
都用。ISO 4833-1 的做法是加权平均：N = ΣC ÷ [V × (n₁ + 0.1 × n₂) × d]，其中 n₁ 是最低被采纳稀释度的板数，n₂ 是高一级的板数，d 是最低被采纳的稀释度。那个 0.1 不是经验系数，就是稀释倍数之比——高一级的板上每个菌落代表的原液体积只有十分之一，所以在加权里只算 0.1 份。随便挑一个等于扔掉一半数据。
涂布 100 µL 和涂布 1 mL，算法一样吗？
算式一样，但除的数不同：CFU/mL = 菌落数 ÷ (稀释倍数 × 涂布体积 mL)。涂 100 µL 就是除以 0.1，相当于**乘 10**。漏掉这一步结果差整整一个数量级，而算出来的量级看着仍然合理，只有跨批次比较时才会暴露。本工具在涂布体积不是 1 mL 时会专门把这个倍数写出来。
CFU 和细胞数是一回事吗？
不是，而且差的方向是固定的。菌落形成单位数的是「长出了菌落的单元」——成串的链球菌、抱团的葡萄球菌、黏在一起的两个细胞，都只长出一个菌落。所以 **CFU 系统性低于真实细胞数**，低多少取决于这株菌爱不爱抱团、打散得够不够。这也是平板计数和 OD₆₀₀ 换算经常对不上的原因之一：OD 连死细胞和碎片一起数。
怎么降低计数误差？
唯一的办法是**数到更多的菌落**——要么每个稀释度多铺几块板，要么选菌落数更多（但仍在可计数范围内）的那一级。相对标准差是 1/√ΣC，ΣC 是所有参与计算的板上菌落数之和，所以铺三块 200 个的板（ΣC=600，±4.1%）比铺一块好得多。把移液器校准得再准也动不了这个数，它根本不是移液误差。
稀释度写 100 还是 1e-2？
本工具的「稀释倍数」填**倍数**，也就是 100 表示稀释 100 倍（即 10⁻²）。写 1e2 也认。这样填的好处是和稀释操作本身对得上——你做的是「取 1 份加 99 份」，想的是「稀释 100 倍」，不用在填表时再换算一次指数。