转化效率计算器
转化效率是感受态细胞的核心指标，单位是 CFU/µg——每微克 DNA 能长出多少个克隆。 算法只有一步除法，但几乎所有人都会漏掉铺板比例，结果直接差一个数量级。
定义与公式
转化效率 (CFU/µg) = 全部菌落数 ÷ DNA 用量(µg)
全部菌落数 = 数到的菌落 × (复苏总体积 ÷ 铺板体积)
关键在第二行。效率是针对整次转化定义的，不是针对你数的那一块板。 复苏后你通常只铺了其中一部分，剩下的菌液里也有转化子，必须按比例折算回去。
漏掉铺板比例会差多少
拿一个典型的标定实验：100 pg pUC19，复苏体积 1000 µL，取 100 µL 铺板，数得 200 个菌落。
| 算法 | 结果 |
|---|---|
| 直接 200 ÷ 0.0001 µg | 2.00 × 10⁶ CFU/µg |
| 先折算：200 × (1000/100) = 2000，再除 | 2.00 × 10⁷ CFU/µg |
差了整整 10 倍，而这个倍数正好等于复苏体积除以铺板体积。 铺 50 µL 就差 20 倍，铺 20 µL 就差 50 倍。
这个错误很隐蔽：算出来的数字量级看着仍然「像那么回事」， 只有在跨批次比较、或者拿去对照厂商标称值时才会露馅。
为什么标定要用极少的 DNA
标定效率时用的 DNA 量都很小（通常在几十到一百皮克量级），原因是 菌落数与 DNA 量的关系只在低量区间才是线性的。
DNA 加多了，感受态细胞会先饱和：再多的质粒也没有细胞可以进， 菌落数不再按比例增长。这时候用「菌落数 ÷ DNA 量」算出来的效率会被系统性低估， 而且加得越多、低估越厉害。
所以：用 1 µg 质粒算出来的「效率」不能拿去和厂商标称值比， 那不是同一个量。要比就照厂商的条件用同样少的 DNA 重做一次标定。
连接产物的效率一定更低
用连接产物转化时算出来的数会远低于超螺旋质粒的标定值，这是正常的，原因有几层：
- 连接反应里只有一部分分子形成了完整的环状产物；
- 线性和缺口 DNA 的转化效率本身就远低于超螺旋；
- 连接体系里的酶、缓冲液成分也会抑制转化。
所以克隆实验的「效率」和感受态标定的「效率」不是同一个指标， 两者不该互相比较。判断连接是否成功，看的是与空载体对照的菌落数之比， 而不是绝对效率值。
菌落长满了怎么办
板上菌落连成片就没法计数了。这时不要估，重做一块铺少一点的板—— 比如从铺 100 µL 改成铺 10 µL，或者把复苏菌液稀释后再铺。 本工具有一个「额外稀释倍数」输入，就是给这种情况用的。
可靠计数的菌落数一般在几十到几百这个区间：太少统计波动大， 太多会因为菌落互相挤压而漏数。
菌落数为 0 的时候
一个菌落都没有时，效率不是 0，而是「低于检出限」。 检出限就是「刚好长出 1 个菌落」所对应的效率——本工具在菌落数为 0 时会把它算出来。 报告结果时应当写成「< 某个值」，而不是写 0。
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常见问题
转化效率的公式是什么？
效率(CFU/µg) = 全部菌落数 ÷ DNA用量(µg)，其中「全部菌落数」= 板上数到的菌落 × (复苏总体积 ÷ 铺板体积)。第二步最容易漏：效率是针对整次转化定义的，不是针对你数的那一块板，复苏液里没铺的部分也有转化子，必须折算回去。
漏掉铺板比例会差多少？
差的倍数正好等于复苏体积除以铺板体积。复苏 1000 µL 铺 100 µL 就差 10 倍，铺 50 µL 差 20 倍，铺 20 µL 差 50 倍。这个错误很隐蔽，因为算出来的数量级看着仍然合理，只有跨批次比较或对照厂商标称值时才会暴露。
为什么标定效率要用很少的 DNA？
因为菌落数与 DNA 量只在低量区间成正比。DNA 加多了感受态细胞会饱和——再多质粒也没有细胞可进，菌落数不再按比例增长，这时算出的效率会被系统性低估，加得越多低估越厉害。所以用 1 µg 质粒算出来的数不能拿去和厂商标称值比，那不是同一个量。
用连接产物算出来的效率特别低，是感受态坏了吗？
不一定。连接产物的效率天然远低于超螺旋质粒：连接反应里只有一部分分子形成完整环状，线性和缺口 DNA 的转化效率本身就低得多，连接体系的酶与缓冲成分还会抑制转化。判断连接是否成功应该看与空载体对照的菌落数之比，而不是绝对效率值。
菌落长满连成片了怎么算？
不要估，重做一块铺少一点的板，或者把复苏菌液稀释后再铺——本工具的「额外稀释倍数」就是给这种情况用的。可靠计数的菌落数一般在几十到几百之间：太少统计波动大，太多会因菌落互相挤压而漏数。
一个菌落都没长出来，效率是 0 吗？
不是 0，是「低于检出限」。检出限等于「刚好长出 1 个菌落」所对应的效率，取决于你这次用的 DNA 量和铺板比例。本工具在菌落数填 0 时会把这个值算出来，报告时应写成「< 某个值」而不是 0。
电转和化转的效率能直接比吗？
可以比，但要在相同条件下测：同一种质粒、同样少的 DNA 量、同样的复苏与铺板方式。条件不一致时数字没有可比性。更实用的做法是把自己每一批感受态的效率按固定流程记录下来，横向比较批次之间的稳定性——这比和别人的数字比更有意义。