OD₆₀₀ 与菌液浓度换算（稀释回算 / 酶标仪光程校正 / 接种量反推）
「我这管菌 OD 是 1.2，大概多少个菌？」——乘一下换算系数就完了， 但这一步之前有三个前提，任何一个不成立，算出来的数都会稳定地偏一个方向， 而且从结果上看不出异常。
前提一：读数得落在线性区
OD 测的是浊度，不是细胞数。密度低的时候两者成正比，密度一高， 细胞开始互相遮挡——后面的细胞躲在前面的细胞阴影里，光照样透过去了， 于是读数系统性偏低，而且越浓偏得越多。
常见的说法是分光光度计在 OD₆₀₀ 0.1–0.4 之间最可靠，宽松一点到 0.8。 超出这个范围的正确做法是稀释到线性区里再读，然后乘回稀释倍数：
真实 OD = 读数 × 稀释倍数 （前提：读数本身落在线性区）
注意这句话里的前提针对的是读数，不是乘回去之后的值。 稀释 10 倍读到 0.25 是合格的；不稀释直接读到 1.2 就是不合格的， 哪怕后者看起来”只是个大一点的数”。本工具的线性区提示只看读数。
前提二：换算系数不是一个普适常数
最常被引用的是：
OD₆₀₀ = 1.0 ≈ 8 × 10⁸ cells/mL （E. coli，1 cm 光程）
但这个数会随菌株、生长期、培养基、仪器在 5 × 10⁸ 到 1 × 10⁹ 之间浮动， 也就是上下差将近一倍。拿它做数量级估算没问题，拿它当精确值就不合适。
唯一可靠的做法是自己标一条曲线：把同一批菌做梯度稀释，一边读 OD、 一边铺板数 CFU，拟合出属于你这台仪器和这株菌的系数。标一次可以用很久。 本工具把系数做成可改的输入，默认填 8 × 10⁸ 只是个起点。
顺带一提，OD 反映的是总细胞数（活的死的都挡光），CFU 只数活的且能长成 单菌落的。两者在对数期接近，进入稳定期后会越差越多——这也是同一株菌 在不同生长期系数不同的原因之一。
前提三：酶标仪的光程不是 1 cm
比色皿是标准的 1 cm 光程，所有教科书系数都按它给。 而 96 孔板里的光程取决于加了多少液体：光垂直穿过液柱， 液柱有多高，光程就有多长。
光程 (cm) ≈ 加样体积 (mL) ÷ 孔底面积 (cm²)
96 孔平底板每孔底面积约 0.32 cm²，所以 200 µL 的几何估算是 0.63 cm； 实测通常略小（约 0.55 cm），差在弯液面上。不校正就会差将近 2 倍， 而且是稳定地偏低，看不出任何异常。
1 cm 等效 OD = 酶标仪读数 × (1 cm ÷ 实际光程)
有一件事必须先确认：部分酶标仪自带光程校正（用 900 nm 与 977 nm 处 水的吸收推算液柱高度，自动折算到 1 cm）。这个功能开着的话， 报出来的读数已经是 1 cm 等效值，再手动乘一次就错了。 不确定就用同一管菌在比色皿和酶标仪各读一次，比值就是你的实际光程。
接种反算
「我要 50 mL 起始 OD 0.05 的培养物，从现在这管 OD 2.5 的菌液取多少？」
取用体积 = 目标体积 × 目标 OD ÷ 当前 OD
50 × 0.05 ÷ 2.5 = 1.0 mL，然后补培养基到 50 mL。 两个 OD 必须是同一口径（都换算到 1 cm 等效、都做过稀释回算）， 否则这个除法没有意义。
数据出处
OD₆₀₀ = 1 对应 8 × 10⁸ cells/mL、以及 5 × 10⁸–1 × 10⁹ 的浮动范围， 是分子生物学手册与试剂厂商技术资料里的常引值；线性区 0.1–0.4（宽松到 0.8） 同样来自仪器厂商与实验室方案的通行说法。96 孔板光程 0.25–0.55 cm （随加样体积变化）来自酶标仪校准方案。这些都是量级参考，不是定值—— 正文里反复强调自己标曲线，就是因为它们本来就该被各实验室各自确定。
相关工具
由两个时间点的 OD 求倍增时间与生长速率见 倍增时间计算； 血细胞计数板数细胞见 细胞计数； 按细胞数投病毒见 MOI 计算器； 梯度稀释怎么配见 稀释计算器。
常见问题
OD₆₀₀ = 1.0 是多少个细菌？
对 E. coli、1 cm 光程，常引的值是约 8 × 10⁸ cells/mL。但这个系数会随菌株、生长期、培养基和仪器在 5 × 10⁸ 到 1 × 10⁹ 之间变，上下差近一倍，所以它只适合做数量级估算。要准就自己做一条 OD–CFU 标准曲线：同一批菌梯度稀释，一边读 OD 一边铺板数落，拟合出自己的系数，标一次能用很久。
OD 读到 1.2 了，直接乘系数行不行？
不行，会偏低。OD 测的是浊度，密度一高细胞就开始互相遮挡，后面的细胞躲在前面的阴影里，读数跟不上真实密度，而且越浓偏得越多。常见的可靠区间是 OD₆₀₀ 0.1–0.4（宽松到 0.8）。正确做法是稀释到这个区间里读，再乘回稀释倍数——注意判断线性与否要看**读数本身**，不是乘回去之后的值。
酶标仪读的 OD₆₀₀ 能直接用教科书系数吗？
不能，除非先折算光程。比色皿是标准 1 cm，而 96 孔板的光程取决于加样体积——光垂直穿过液柱，液柱多高光程就多长。96 孔平底板每孔底面积约 0.32 cm²，200 µL 的几何估算是 0.63 cm，实测通常约 0.55 cm（差在弯液面）。不折算菌数会低估将近一倍。折算式是：1 cm 等效 OD = 读数 × (1 ÷ 实际光程)。
我的酶标仪说有光程校正，还要不要自己乘？
不要，会重复校正。部分酶标仪用 900 nm 与 977 nm 处水的吸收推算液柱高度，自动把读数折算到 1 cm 等效值——这个功能开着的时候，报出来的数已经校正过了。不确定开没开，就拿同一管菌在比色皿和酶标仪各读一次：比值就是你的实际光程，如果比值接近 1，说明校正已经开着。
要 50 mL 起始 OD 0.05 的培养物，从 OD 2.5 的过夜菌取多少？
取 1.0 mL，补培养基到 50 mL。算式是 目标体积 × 目标 OD ÷ 当前 OD = 50 × 0.05 ÷ 2.5 = 1.0 mL。前提是两个 OD 口径一致：都做过稀释回算、都折算到 1 cm 等效，否则这个除法没有意义。
OD 换算出来的数和铺板数出来的 CFU 对不上，哪个错了？
多半都没错，它们本来就测不同的东西。OD 反映**总细胞数**——活的、死的、碎片都挡光；CFU 只数**活的且能长成单菌落**的。对数期两者比较接近，进入稳定期后死细胞累积，OD 会明显高于 CFU。这也是同一株菌在不同生长期换算系数不同的原因之一。报告时写清用的是哪一种。
读数为 0 或者非常小怎么办？
先确认扣了空白——培养基本身在 600 nm 有吸收，尤其是含酵母提取物的富培养基，不扣空白会把培养基的吸收算成菌。扣完空白仍然接近 0，说明确实几乎没有菌。另外读数低于 0.1 时接近仪器噪声，相对误差很大，可以少稀释一点让读数落进 0.1–0.4。