引物复溶与稀释计算器

合成好的引物寄到手里是冻干粉，管上只写一个量（比如 32.5 nmol 或 200 µg）。 要配成能用的母液，得自己算加多少水——这一步算错，后面所有反应的引物浓度都是错的。

这个工具把复溶和稀释一次算清，并顺带给出这管引物够做多少个反应。

换算本身：把单位写全就不会错

出错几乎都出在单位上。把定义摊开写：

C(µM) = µmol/L = nmol/mL = (nmol / 1000) 每 µL

所以配母液要加的体积是：

V(µL) = n(nmol) × 1000 / C(µM)

记住 100 µM 这个特例就够用了：配 100 µM 时，V = n × 10。 一管 32.5 nmol，加 325 µL 水，就是 100 µM。

为什么大家都配 100 µM

100 µM 是母液的事实标准，原因是它同时满足两件事：

• 浓度够高，冻存体积小、反复冻融次数少；
• 稀释倍数好算，稀释 10 倍就是 10 µM 工作液， 而 10 µM 工作液在 20 µL 体系里加 1 µL，终浓度正好 0.5 µM—— 这是 PCR 引物最常用的终浓度。

整条链路都是 10 的整数倍，心算就能核对，这比省那点移液枪操作重要得多。

一管引物能做多少反应

以 32.5 nmol 为例：

所以常规合成规模（最小那一档）对绝大多数实验都是远远够用的， 没必要为了「够用」去订更大的合成量。真正的限制是引物的保存时间，不是量。

nmol 还是 µg

管上两个数都有时，用 nmol。

因为 µg 换算回 nmol 需要分子量，而分子量取决于末端形式： 合成引物默认是 5′-OH，比 5′ 磷酸的形式轻一个 HPO₃（79.98 g/mol）。 20 nt 的引物上这就是约 1.3% 的差别。本工具按 5′-OH 算， 与 序列基本统计 给出的 5′-OH 分子量口径一致。

如果你订的是 5′ 磷酸化引物（做连接、LCR 之类），换算要用带磷酸的分子量。

用水还是 TE

两种都常见，取舍在于：

• TE（10 mM Tris，0.1–1 mM EDTA） 更稳，EDTA 螯合二价金属离子， 抑制依赖金属的核酸酶，长期冻存首选。
• 水 不引入任何缓冲成分，适合对下游体系敏感的应用。 但水的 pH 容易偏酸，酸性条件会促进脱嘌呤。

注意 TE 里的 EDTA 会带进反应体系，如果引物加量大、而反应又对 Mg²⁺ 敏感（比如某些 qPCR）， 用低 EDTA 的 TE（0.1 mM）或直接用水。

开管前先离心

冻干粉在运输中会飞散到管壁和管盖上。开盖前先短暂离心把粉甩到管底， 否则开盖那一下就损失掉一部分——而你并不知道损失了多少， 算出来的浓度自然也是错的。这是复溶环节最常见、也最容易避免的系统误差。

这个工具的边界

只按标示量算，不测浓度。 标示的 nmol 是合成后按 OD 估的，本身有误差。 要知道复溶后的真实浓度，得测 A260——用 核酸浓度换算。

不支持从 OD₂₆₀ 单位换算。 有些厂商管上标的是 OD 而不是 nmol， 换算需要该序列的消光系数（需按最近邻方法逐条计算），本工具不做这一步。

不判断引物本身好不好。 复溶只是拿到引物之后的第一步； 序列本身是否会形成二聚体、Tm 是否匹配，见 引物二聚体检测 和 最近邻法 Tm 计算器。